Top10F 感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

本产品是采用大肠杆菌Top10F 感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。来源于Top10，适合于trc,tac,lac启动子通过IPTG诱导表达，可用于构建*、蓝白斑筛选、 一些表达毒性蛋白质粒的扩繁。

基因型：F′{lacIq Tn10 (Tetr)} mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1araD139 ?(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG

特点：1.此菌株F`因子携带 lacIq 抑制子，可抑制 trc，tac，lac 等启动子下游基因的表达，从而可以用于一些表达毒

性蛋白质粒的扩繁。2. recA1和endA1的突变,有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。3.存在lacIqZΔM15基因使此菌株可以进行蓝白斑筛选。具四环素（Tetr）抗性。pUC19质粒检测，转化效率可达108 cfu/μg DNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，静置冰浴30min。

3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中静置2-3min，该过程不要摇动离心管。

4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。

5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．感受态细胞*在冰中缓慢融化，8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2．混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3．转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

*本试剂仅供实验室研究使用