XL10-Gold感受态细胞

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1.产品简介：

本产品是采用大肠杆菌XL10-Gold菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，特异性用于大质粒或珍贵连接产物转化或构建文库的超级感受态细胞。

基因型：TetrΔ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1  gyrA96 relA1 lac Hte [F′proAB lacIqZΔM15 Tn10  (Tetr) Amy Camr]

特点：1.XL10-Gold是目前转化效率*的感受态细胞。是特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型性，多用于文库构建，已成功应用于40kd质粒的构建。2. [Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]赋予XL10-Gold缺失几乎所有已知的限制酶切系统；同时缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量。3.hsdSMR突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。4. 重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性。此菌株具有四环素（Tetr）和氯霉素（Camr）抗性。5. lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于蓝、白斑筛选pUC19质粒检测，转化效率可达109 cfu/μg DNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。

3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。

4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。

5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养， 37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．感受态细胞*在冰上融化。

2．混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3．转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

4．此 XL10-Gold菌株对<40 μg/ml氯霉素有抗性，但对100 μg/ml氯霉素敏感。

*本试剂仅供实验室研究使用