BJ5183-AD-1感受态细胞

保存条件：-80℃。

1．产品简介：

本产品是采用大肠杆菌BJ5183菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，有助于重组DNA的稳定和高纯度DNA的提取，是目前腺病毒系统最常用的感受态细胞。

基因型：endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (Strr) [pAdEasy-1 (Ampr)]

特点：1．BJ5183-AD-1携带了腺病毒质粒pAdeasy-1的BJ5183菌株，具有较高重组活力，有利于转入的目的基因与腺病毒质粒的重组。2．endA1（缺失核酸内切酶）的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。3．BJ5183-AD-1菌株细胞中已经提前转入了腺病毒质粒pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]，赋予该菌株氨苄抗性，在病毒质粒构建时，只需转入线性化的目的质粒即可，简化了实验步骤，提高了病毒质粒重组概率。其具链霉素抗性，氨苄抗性。pCAMBIA2301质粒(size:1163bp)检测，转化效率可达105 cfu/μgDNA。

2．使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。

3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。

4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。

5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养， 37℃培养12~16h。

3．注意事项：

1．刚化冻的细胞转化效率*，避免反复化冻。

2．BJ5183-AD-1菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后，可选择在其他大肠杆菌菌株中扩繁，纯化质粒。

*本试剂仅供实验室研究使用