产地 | 中国 |
品牌 | Frdbio |
货号 | MCC0090 |
用途 | |
包装规格 | 100ul*10 |
纯度 | % |
CAS编号 | |
是否进口 |
Rossetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
MCC0090 | Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞 | 100μl*10 |
保存条件:-80℃。
1.产品简介:
本产品是采用大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。同时集合了Origami(DE3)和Rosetta(DE3)的优点,有助于含二硫键蛋白的高效表达,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。
基因型:Δ(ara-?‐leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pLysSRARE (CamR, KanR, StrR, TetR)
特点:1.Rosetta-?‐gami系列菌株来源于Origami系列宿主菌,该系列菌株的优点除了含有Origami菌株原有的TrxB和Gor基因突变提高含二硫键正确折叠,有助于含二硫键蛋白的高效表达,同时含有Rosetta系列菌株中含有的真核细胞稀有密码子。2.含有pRARE质粒,能够提供AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,和GGA六个真核细胞中的稀有密码子tRNA,能够有效提升真核细胞蛋白的表达水平。3.含有pLySs质粒,能够产生T7溶菌酶,可以有效降低目的基因的基础表达水平,的起始复制位点是p15 Origin,这使得该质粒能够和pUC-?‐及pBR322-?‐衍生的质粒互相共存。4. rpsL突变使得该菌株具有链霉素抗性DE3是溶源性的 λDE3,所以带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体,及其他T7启动子系列载体。被建议使用于含有Bla标记的氨苄抗性表达质粒,具有具有氯霉素,卡那,链霉素和四环素抗性,当使用pCDF系列载体时,还需要使用壮观霉素(Spectinomycin)进行筛选。pUC19质粒检测,转化效率可达108cfu/μg DNA。
2.使用说明:
1.取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30min。
3.42℃热击45sec,然后快速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min,该过程不要摇动离心管。
4.每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床, 150 rpm振荡培养45~60min使菌体复苏。
5.根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12~16h。
3.注意事项:
1.刚化冻的细胞转化效率*,避免反复化冻。
2.整个动作要轻柔。
3.质粒质量和浓度等的差异会使转化效率有所下降。
*本试剂仅供实验室研究使用