生物素快速标记试剂盒常见问题和解答:
1.生物素与抗体的比例怎么计算?比如说标记1mL的2mg/mL的抗体(100kDa),大概添加比例是多少?
答:一般抗体:生物素=1:20 摩尔比,抗体浓度高比例可以做到1:15,如果浓度低,建议1:20以上,最高可以做到1:50,前提是你必须做到定量是准确的。
2. 在标记过程中离心转速12000g不会对超滤管有影响吗?且超滤转速高时间长抗体会不会流失掉呢?标记的第1和4步说要反复离心的意思可以理解为置换缓冲液,相当于透析吗?
答:标记的过程中超滤管的离心转速是12000rpm,不是12000g,当然每个离心机换算会有不同,不会对超滤管有影响,抗体的分子不会穿过超滤管的滤膜流失掉的。多次离心的目的就是要把原来溶液中的缓冲液置换成目的缓冲液,或者是通过反复超滤稀释,去除掉游离的小分子,和透析的作用是一样的。对于超滤的效果,主要看每次超滤前体积和超滤后剩余体积,以及超滤次数。